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      納米金結合物的應用程序有哪些?

      更新時(shí)(shí)間:2024-05-30      點(diǎn)(diǎn)擊次數:150

      原地的雜交

      納米金探針的小尺寸及其隨后接近核抗原的能力,與銀增強獲得的高靈敏度相結合,使它們成為用于特異DNA序列的超靈敏原位雜交檢測的優(yōu)(yōu)異試劑,無(wú)(wú)論有無(wú)(wú)原位PCR。使用生物素化的酪胺(催化報道沉積或CARD,也稱(chēng)(chēng)為酪胺信號擴增或TSA)擴增靶信號獲得了驚人的結果:用納米金-鏈霉抗生物素蛋白和銀增強檢測產(chǎn)(chǎn)物,即使在只有一個(gè)(gè)或兩個(gè)(gè)靶基因拷貝的細胞中也產(chǎn)(chǎn)生清晰的信號

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      用CARD擴增納米金-銀染技術(shù)(shù)檢測SiHa細胞中人乳頭瘤病毒16的單拷貝。這種來(lái)(lái)源于宮頸癌的細胞系僅含有一到幾個(gè)(gè)拷貝的人乳頭瘤病毒16,其表現為單個(gè)(gè)斑點(diǎn)(diǎn)。細胞離心制劑,核固紅復染(光學(xué)(xué)顯微照片由薩爾茨堡州蘭肯斯坦市G. Hacker博士提供。奧地利)。

      優(yōu)(yōu)勢

      • 比NBT-BCIP堿性磷酸酶或過(guò)(guò)氧化物酶結合標記擴增用于單基因拷貝解析更靈敏。
      • 大多數情況下不需要更長(cháng)(cháng)的PCR程序:避免了由于錯誤引發(fā)(fā)和擴增子擴散導致的假陽(yáng)(yáng)性。
      • 用標準明視野顯微鏡很容易看到黑色。不需要昂貴的熒光光學(xué)(xué)器件,也沒(méi)(méi)有自發(fā)(fā)熒光或漂白的問(wèn)(wèn)題。
      • 黑色信號顏色與全強度標準細胞和核染色(H & E、核堅牢紅、甲基綠)兼容。
      • 也可用于電磁研究的高空間分辨率信號。

      電子顯微鏡

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      納米金為電子顯微鏡樹(shù)(shù)立了很好的性能標準。

      納米金綴合物很容易擴散幾十微米到組織、滲透細胞和細胞核中,而大多數膠體金探針很難做到這一點(diǎn)(diǎn)。染色更符合化學(xué)(xué)計量,背景更低。盡管1.4納米金顆粒在50-120 kX放大倍數下甚至在80納米的切片中(在其他未染色的樣品中)都是直接可見(jiàn)(jiàn)的,但在用銀顯影劑(LI銀或HQ銀)短暫增強(1-5分鐘)后它們更容易顯現。即使使用醋酸鈾、鋨或檸檬酸鉛染色,也可以在較低的放大倍數下輕松看到2至100納米的銀顆粒(大小取決于顯影時(shí)(shí)間)。

      這張掃描透射電子顯微鏡(STEM)圖像清楚地顯示,單馬來(lái)(lái)酰亞胺-納米金標記(箭頭)具體發(fā)(fā)生在IgG分子的鉸鏈硫醇位點(diǎn)(diǎn)。

      光學(xué)(xué)和共聚焦顯微鏡

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      用抗微管蛋白初級抗體標記的紡錘體微管,隨后是(左)山羊抗小鼠膠體金或(右)山羊Fab抗小鼠納米金(光學(xué)(xué)顯微照片由俄亥俄州立大學(xué)(xué)D. Vandré和R. Burry博士提供。原始放大倍數= 1300倍)。

      納米金探針對透化細胞和細胞核具有出色的穿透性,類(lèi)(lèi)似于免疫熒光探針,遠優(yōu)(yōu)于膠體金探針?!凹{米金-Fab"探針比免疫熒光IgG標記小。納米金探針絕對不會(huì )(huì )聚集,而且非常穩定,因為納米金與結合生物分子共價(jià)(jià)連接。通過(guò)(guò)隨后的短暫(5-15分鐘)銀增強(LI銀),它們給出了即使在普通明場(chǎng)(chǎng)光學(xué)(xué)顯微鏡(不需要紫外光學(xué)(xué)器件)中也可見(jiàn)(jiàn)的信號,其靈敏度通常優(yōu)(yōu)于熒光。由于同樣的納米金探針也可以用于電鏡,因此可以在光學(xué)(xué)顯微鏡或共聚焦顯微鏡下進(jìn)(jìn)行初步染色,同時(shí)(shí)可以在超微結構水平上檢查平行樣品。這種靈活性是熒光探針所不具備的。納米金現在可以與鏈霉親和素和抗生物素Fab’結合用于核酸檢測。

      為快速簡(jiǎn)(jiǎn)單的LM開(kāi)(kāi)發(fā)(fā)
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      印跡和免疫化學(xué)(xué)技術(shù)(shù)

      納米金-抗體結合物已用于檢測《0.1皮克(7×10-19摩爾)的抗原。這種靈敏度優(yōu)(yōu)于大多數放射性、酶、膠體金或熒光技術(shù)(shù)。事實(shí)(shí)上,納米金標記是已知*靈敏的檢測方法之一。它與化學(xué)(xué)發(fā)(fā)光法不相上下,但提供了長(cháng)(cháng)期記錄,沒(méi)(méi)有膠片、顯影和暗室程序的麻煩,而且時(shí)(shí)間短得多。納米金試劑也可用于Westerns,我們的納米金-鏈霉親和素或納米金-抗生物素結合物可提供超靈敏的核酸檢測。

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      納米金免疫印跡

      納米金-用鋰銀(納米探針)開(kāi)(kāi)發(fā)(fā)的針對小鼠IgG的抗小鼠抗體Fab。這些超小金顆粒很好地使銀沉積成核,從而實(shí)(shí)現了高的靈敏度。該免疫斑點(diǎn)(diǎn)印跡顯示出0.1皮克的靈敏度(箭頭)。

      用肉眼顯影你的斑點(diǎn)(diǎn)

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      納米金標記條帶的凝膠染色

      蛋白質(zhì)(zhì)或其他分子用納米金標記后,可以在聚丙烯酰胺凝膠上運行。隨后,可能會(huì )(huì )開(kāi)(kāi)發(fā)(fā)出LI Silver或者GoldEnhance™對含金帶進(jìn)(jìn)行特殊染色。該過(guò)(guò)程快速、靈敏且具有選擇性,只需幾分鐘即可完成密集染色。它也適用于轉印污點(diǎn)(diǎn)。這可用于區分哪些成分用納米金標記

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