對細胞進(jìn)(jìn)行鋪板要進(jìn)(jìn)行哪些操作

　　細胞鋪板是細胞實(shí)(shí)驗中最常見(jiàn)(jiàn)又必須掌握的一門(mén)(mén)技術(shù)(shù)，看似簡(jiǎn)(jiǎn)單，然而卻經(jīng)(jīng)常遇到如細胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現象，結果就是只能整板扔掉，重新鋪板，既耽擱時(shí)(shí)間又浪費了細胞及培養板等資源。所以在進(jìn)(jìn)行細胞鋪板的時(shí)(shí)候應該注意哪些事情。

　　細胞居中和細胞邊緣化

　　從經(jīng)(jīng)濟和高效的角度來(lái)(lái)說(shuō)(shuō)，需要根據實(shí)(shí)驗目的選擇不同規格的培養板。如在進(jìn)(jìn)行藥物對待測細胞半抑制率(IC50)測試時(shí)(shí)，通常使用96孔板，一方面可以設置濃度梯度；另外還可一次性測多個(gè)(gè)藥物，減少實(shí)(shí)驗誤差。

　　收集細胞要混勻

　　消化后的細胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細胞團充分地吹打開(kāi)(kāi)，最好是單個(gè)(gè)的狀態(tài)(tài)，但同時(shí)(shí)又不能損傷細胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團！然后懸浮離心后的細胞團時(shí)(shí)，先不要把所有液體都加進(jìn)(jìn)去！一般先加2mL液體，然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起，細胞要像云霧一樣散開(kāi)(kāi)，這樣易于形成單細胞。象下圖所示的這種移液器就非常好用。

　　接種細胞須小心

　　鋪6孔板，12孔板或24孔板，先在每個(gè)(gè)孔里面加1mL的培養基，晃動(dòng)(dòng)使之鋪勻整個(gè)(gè)孔底，然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入，這樣細胞懸液會(huì )(huì )平鋪在整個(gè)(gè)孔底，細胞分散較均勻，注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。

　　輕輕敲打勿抱團

　　細胞懸液加完后，將細胞培養板抬高，對著(zhù)(zhù)燈光，從底部往上看，看細胞有沒(méi)(méi)有抱團。如果有抱團的話(huà)(huà)，用手指從底部輕輕敲打，使之分散。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下，效果不錯。參數要設置成振幅小而頻率高。

　　十字交叉要水平

　　觀(guān)(guān)察和敲打后放入培養箱，然后畫(huà)(huà)“十字”，就是把細胞培養板貼著(zhù)(zhù)培養箱擱板，前后方向來(lái)(lái)回晃動(dòng)(dòng)10次，再左右方向晃動(dòng)(dòng)10次，正好是一個(gè)(gè)“十” 字形。然后就讓它靜靜地呆在培養箱擱板上，沒(méi)(méi)事不要去動(dòng)(dòng)它。這里要注意的是，托架應該裝在四根立柱相同高度的孔上，培養箱的擱板要水平校正，盡量地做到水平。擱板會(huì )(huì )向一個(gè)(gè)方向傾斜，對于貼壁時(shí)(shí)間長(cháng)(cháng)的細胞，就算當時(shí)(shí)混勻了，放進(jìn)(jìn)培養箱后也搖勻了，但是重力作用下細胞也會(huì )(huì )向一側聚集。 培養箱里面或者外面盡量不要放可以產(chǎn)(chǎn)生振動(dòng)(dòng)的儀器，比如蠕動(dòng)(dòng)泵、離心機、渦旋器一類(lèi)(lèi)的儀器。這些儀器產(chǎn)(chǎn)生的振動(dòng)(dòng)對細胞貼壁有影響，也可能會(huì )(huì )導致細胞貼壁不均勻。